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微載體生物反應(yīng)器的應(yīng)用

 更新時(shí)間:2022-06-02 點(diǎn)擊量:1593

標(biāo)簽:生物反應(yīng)器  載體 生物技術(shù)
   微載體生物反應(yīng)器是一種用于大批量培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生物反應(yīng)器,它即可以滿足培養(yǎng)依賴貼壁和非貼壁的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,還滿足于多管陣列的生物反應(yīng)器系統(tǒng)的所需條件。
    近年來(lái),創(chuàng)造生物活性分子(包括單克隆抗體)的新技術(shù)創(chuàng)造了一個(gè)蓬勃發(fā)展的生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)。目前將基因?qū)爰?xì)胞這項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展也相對(duì)區(qū)域成熟,大規(guī)模生產(chǎn)生物細(xì)胞的生物反應(yīng)器也是層出不窮。常見的類型主要可分為微生物發(fā)酵培養(yǎng)系統(tǒng)和細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。微生物發(fā)酵系統(tǒng)通常很少用于規(guī)模化生產(chǎn)當(dāng)前所需的生物分子,這主要是因?yàn)榧?xì)菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)不同于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的蛋白質(zhì)。因此,哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)正在成為醫(yī)藥產(chǎn)品生產(chǎn)中一個(gè)非常重要的領(lǐng)域。90年代初,在生物反應(yīng)器領(lǐng)域中,氧轉(zhuǎn)移不足成為哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)的生物反應(yīng)器的所面臨的主要問(wèn)題。
例如,單克隆抗體的體內(nèi)生產(chǎn)涉及用產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞對(duì)小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)接種,然后收集富含抗體的腹水。然而,一只小鼠通常需要長(zhǎng)達(dá) 8 周的時(shí)間才能產(chǎn)生 40-200 毫克的抗體,而且回收的抗體被小鼠蛋白質(zhì)污染,當(dāng)注射到人體中時(shí)會(huì)導(dǎo)致血清病。此外,老鼠的維護(hù)成本很高,而且生產(chǎn)成本不會(huì)隨著規(guī)模的擴(kuò)大而降低。此外,不能在小鼠中培養(yǎng)人單克隆抗體。
鑒于上述缺點(diǎn),通常使用分批或連續(xù)系統(tǒng)的體外培養(yǎng)技術(shù)來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的大批量成產(chǎn)。然而,體外細(xì)胞密度通常不超過(guò)1×10 7 個(gè)細(xì)胞/ml,所得產(chǎn)物濃度也較低(0.01-0.1 mg/ml vs. 1-10 mg/ml 體內(nèi))。


     分批培養(yǎng)涉及在一批培養(yǎng)基中生長(zhǎng),而不是嘗試從細(xì)胞中連續(xù)分離培養(yǎng)基和產(chǎn)品。分批培養(yǎng)系統(tǒng)的一個(gè)主要問(wèn)題是氧氣轉(zhuǎn)移不良。哺乳動(dòng)物細(xì)胞需氧量介于 0.053 毫摩爾 O 2 /L-hr-10 6細(xì)胞/毫升至 0.59 毫摩爾 O 2 /L-hr-10 6 之間細(xì)胞/毫升。與微生物發(fā)酵不同的是,由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞缺乏剛性細(xì)胞壁并且通常無(wú)法承受由此產(chǎn)生的剪切力,因此無(wú)法迫使氧氣氣泡通過(guò)反應(yīng)器。后來(lái)改善了細(xì)胞充氣的方法,例如使用氣升對(duì)流力和限制葉輪技術(shù)。然而,這些方法只能減少對(duì)細(xì)胞的剪切力和物理創(chuàng)傷,并不能消除這些問(wèn)題。盡管如此,細(xì)胞產(chǎn)量仍然受到氧濃度的限制。這種培養(yǎng)方式的另一個(gè)重要的問(wèn)題是消除廢物的問(wèn)題。離心可用于去除舊培養(yǎng)基,但這會(huì)增加污染的可能性,也會(huì)導(dǎo)致大量細(xì)胞損傷。
還有一種規(guī)?;?xì)胞培養(yǎng)方式是將細(xì)胞封裝在海藻酸鹽凝膠或海藻酸鹽凝膠中,并被具有可控孔的半透聚合物膜包圍,這是培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的另一種方法。在前一種程序中,細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)入培養(yǎng)基,而在后一種方法中,產(chǎn)品被困在珠子中,然后必須破裂以釋放產(chǎn)品。雖然這可以產(chǎn)生高濃度的抗體,但這兩種方法都是有限的,因?yàn)榧?xì)胞最終會(huì)破壞珠子并受到所有批處理過(guò)程的限制。
     連續(xù)培養(yǎng)包括在連續(xù)的基礎(chǔ)上從培養(yǎng)基中分離細(xì)胞。幾種方法包括恒化器細(xì)胞保留和細(xì)胞保護(hù)系統(tǒng)(例如,中空纖維、陶瓷盒)。與分批培養(yǎng)相比,連續(xù)培養(yǎng)的主要優(yōu)點(diǎn)是能夠控制關(guān)鍵培養(yǎng)基成分的濃度;在毒性積累發(fā)生之前清除廢物的能力;將細(xì)胞培養(yǎng)物保持在其生長(zhǎng)狀態(tài)更長(zhǎng)時(shí)間的能力;以及重復(fù)使用培養(yǎng)基和昂貴的生長(zhǎng)因子、血清和其他添加劑的能力。
     細(xì)胞滯留生產(chǎn)受益于培養(yǎng)基的連續(xù)流動(dòng),通過(guò)去除生長(zhǎng)抑制劑和為細(xì)胞提供新鮮的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,導(dǎo)致更高的細(xì)胞密度和產(chǎn)品產(chǎn)量。許多細(xì)胞滯留系統(tǒng)利用微載體來(lái)培養(yǎng)貼壁依賴性細(xì)胞。微載體的包括中空玻璃微球和帶電或膠原包被的微球。這些微載體除了能夠提供大的附著表面外,還可以促進(jìn)懸浮和分離。
     在該領(lǐng)域還有另一種細(xì)胞培養(yǎng)方法:中空纖維反應(yīng)器系統(tǒng),它是通過(guò)中空毛細(xì)管灌注培養(yǎng)基,使細(xì)胞暴露于更自然的環(huán)境中。細(xì)胞可以由恒定流量的新鮮培養(yǎng)基和氣體支持,并且可以直接去除產(chǎn)物。這種方法的一個(gè)缺點(diǎn)在于細(xì)胞在毛細(xì)管周圍和之間生長(zhǎng)并最終破壞纖維,因此,該反應(yīng)器系統(tǒng)不能長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行,并且難以去除培養(yǎng)細(xì)胞。
中空纖維反應(yīng)器的另一個(gè)嚴(yán)重缺點(diǎn)是有害的代謝和營(yíng)養(yǎng)梯度沿著毛細(xì)管的長(zhǎng)度沿軸向和徑向發(fā)展,因?yàn)樾枰橘|(zhì)非常緩慢地流過(guò)具有窄內(nèi)徑的管。受溶解度限制的氧氣和二氧化碳張力相對(duì)集中于在管的兩端。另外,由于培養(yǎng)基緩慢流動(dòng),營(yíng)養(yǎng)物的分布容易受中空纖維反應(yīng)器中的擴(kuò)散影響而導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不均衡。

      近些年,技術(shù)革新后的微載體培養(yǎng)生物反應(yīng)器結(jié)合了全自動(dòng)微電腦控氧系統(tǒng)有效解決了氧轉(zhuǎn)移不足等棘手問(wèn)題,成為規(guī)?;瘧腋〖?xì)胞培養(yǎng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的主流實(shí)驗(yàn)設(shè)備。
      蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司13年專注于實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和生物試劑及耗材的專業(yè)供應(yīng),提供細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)備主要包括生物反應(yīng)器、生物發(fā)酵罐、微載體培養(yǎng)生物反應(yīng)器、不銹鋼微生物培養(yǎng)生物反應(yīng)器、不銹鋼發(fā)酵罐、玻璃發(fā)酵罐等。

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