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蛋白質(zhì)電泳常用試劑配制方法

 更新時間:2023-06-13 點擊量:4349

蛋白質(zhì)電泳常用試劑配制方法如下:

一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

3×SDS-PAGE loading buffer10ml
1M Tris-Hcl (PH 6.8)1.5ml
SDS0.6g
BPB(溴酚藍)30mg
甘油(丙三醇)3ml
去離子水5.5ml

1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,進行溶解;

2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中,1ml/管,常溫放置;

3、使用前,每管加入30µL巰基乙醇。

注意事項:巰基乙醇為危險品,加入的過程在通風櫥中完成,并且?guī)Ш檬痔住?/p>

二、10×PBS的配制

0.1M PBS(10×PBS)1L
NaH2PO4.2H2O2.83g
Nacl85g
Na2HPO4.12H2O28.98g

1、用去離子水將以上藥品進行溶解;(溶解的非常慢,可能需要過夜)

2、調(diào)PH值到7.2,用0.4µm的濾膜過濾。常溫保存;

3、工作時用的是1×PBS。

三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

1.5M Tris-Hcl250ml
Tris45.425g

1、用200ml去離子水將Tris溶解。

2、用濃鹽酸調(diào)PH值到8.8。

3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

注意事項:Tris的緩沖能力很強,調(diào)PH值時,費些時間,但不要調(diào)過。

四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

1M Tris-Hcl250ml
Tris30.275g

1、用200ml去離子水將Tris溶解;

2、用濃鹽酸調(diào)PH值到6.8;

3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml;

4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

五、30%丙烯酰胺的配制

30%丙烯酰胺250ml
丙烯酰胺72.5 ml
BIS甲叉丙烯酰胺2.5 ml

1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml;

2、用濾紙過濾,放在棕色瓶子中,4℃保存。

注意事項:兩種藥品有毒性,配制過程要帶手套和口罩。

六、10%SDS的配制

1.1g SDS加入10ml去離子水進行溶解;

2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

七、10%過硫酸銨的配制

1.1g 過硫酸銨加入10ml去離子水進行溶解。

2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制

5×SDS-PAGE電泳緩沖液1L
Tris15.1g
Glycine(甘氨酸)94g
SDS5g

將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L,常溫保存。工作時用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。

九、考馬斯亮藍R-250染色液的配制

1、往1g考馬斯亮藍R-250中加入250ml異丙醇,在磁力攪拌器上攪拌六小時以上;

2、加入650ml去離子水,磁力攪拌器攪拌過夜;

3、再加入100ml冰醋酸進行溶解,磁力攪拌器攪拌;

4、在通風櫥內(nèi)用濾紙進行過濾。常溫保存。染色液只能反復用兩次。

注意事項:在磁力攪拌器上攪拌時,要把容器封口。

十、脫色液的配制

脫色液1L
醋酸(冰乙酸)100ml
乙醇(無水乙醇)50ml
去離子水850ml

常溫保存。

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