生物制藥的生產(chǎn)過程中，雜質(zhì)產(chǎn)生是不可避免的。這些雜質(zhì)包括宿主細胞來源的核酸、宿主細胞蛋白和潛在的病毒，以及工藝中的溶出析出物等。這些雜質(zhì)會對制品的質(zhì)量和安全性產(chǎn)生負面影響，因此需要在后續(xù)的純化過程中進行去除。本文將介紹驗證這些雜質(zhì)去除的方法以及一些實現(xiàn)過程中的技術挑戰(zhàn)。

  宿主細胞蛋白是一種常見的雜質(zhì)，可能引起制品的嚴重免疫反應。為了去除這些雜質(zhì)，可以使用SDS-PAGE、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法和高效液相色譜（HPLC）等技術。其中，ELISA是目前用于活性藥物成分放行檢測以及中間體樣品檢測的行業(yè)標準。然而，ELISA的靈敏度通常受到限制。因此，使用縮小模型進行的放射性標記研究方法可以用于確定HCP去除的能力。這種方法需要制備代表性的放射性標記的HCP樣品，使用125I標記實現(xiàn)。挑戰(zhàn)性實驗可以在單個的層析步驟上或順序執(zhí)行的單元操作上進行。使用縮小模型的挑戰(zhàn)性實驗也通常用于驗證異染色質(zhì)達標性的去除。

  另一個重要的雜質(zhì)是細胞培養(yǎng)添加劑。這些添加劑會提高表達水平或維持細胞系的穩(wěn)定性，但對人體可能具有潛在的毒性、生物活性或免疫源性。因此，在純化過程中需要證明它們的清除率。例如，甲氨蝶呤、抗生素和生長因子等成分，經(jīng)放射性標記后使用縮小模型進行挑戰(zhàn)性實驗來證明各個步驟的清除率。根據(jù)添加到細胞培養(yǎng)液中的起始量和清除率，可以估算出活性藥物成分中的這些組分的含量，并進行安全性評估。

  來源于細胞培養(yǎng)的產(chǎn)品需要證明純化工藝具有去除病毒的能力。病毒的去除驗證需要在縮小模型上進行，類似于用于HCP和DNA去除的驗證。選擇一組模式病毒進行挑戰(zhàn)性實驗。這些模式病毒要反應不同大小和形狀的范圍，并包括114 DNA和RNA病毒和/或包膜或非包膜病毒家族。基于細胞培養(yǎng)物中的RVLP的數(shù)量，純化過程中病毒效價的總體降低要比起始材料中可能存在的水平高幾個數(shù)量級。

  純化工藝也會產(chǎn)生一些自身的雜質(zhì)，包括層析柱脫落的配基，比如蛋白A配基。必須證明純化工藝中蛋白A能夠去除到很低并且水平穩(wěn)定。另外，純化過程中還會產(chǎn)生內(nèi)毒素等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)是衍生自細菌（比如大腸桿菌）的脂多糖成分。它們也有可能通過受污染的原材料引入。因此，需要使用縮小模型進行雜質(zhì)去除驗證研究。

  在實現(xiàn)雜質(zhì)去除過程中，還需要克服許多技術挑戰(zhàn)。例如，ELISA方法的靈敏度限制、縮小模型標記問題、足夠代表性縮小模型構建、診斷的選擇以及去除方案的制定等。此外，在縮小模型中挑戰(zhàn)性實驗的設計和驗證等也是關鍵。

  總之，在生物制藥的生產(chǎn)過程中，驗證雜質(zhì)去除的能力非常關鍵，因為它們可能會對制品的安全性和質(zhì)量產(chǎn)生負面影響。通過選擇合適的驗證方法和克服實現(xiàn)過程中的技術挑戰(zhàn)，可以保證最終的制品符合監(jiān)管要求，并確保制品的安全和品質(zhì)。

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