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免疫熒光技術(shù)簡介

 更新時間:2024-11-12 點擊量:705

概述:

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術(shù),它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán),再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。


直接熒光法.png

直接熒光法


目的:

測定內(nèi)分泌激素、蛋白質(zhì)、多肽、核酸、神經(jīng)遞質(zhì)、受體、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、腫瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。


間接熒光法.png

間接熒光抗體染色


步驟:

1、細(xì)胞準(zhǔn)備;

2、固定。根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞,固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月;

3、通透。使用交聯(lián)劑(如多聚甲醛)固定后的細(xì)胞,一般需要在加入抗體孵育前,對細(xì)胞進(jìn)行通透處理,以保證抗體能夠到達(dá)抗原部位。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。

4、封閉。使用封閉液對細(xì)胞進(jìn)行封閉。

5、一抗結(jié)合。室溫孵育1h或者4℃過夜。

6、二抗結(jié)合。間接免疫熒光需要使用二抗。

7、封片,熒光顯微鏡檢查

倒置熒光顯微鏡 MF53-N.jpg



免疫熒光技術(shù)用到的實驗室儀器和設(shè)備:


免疫熒光技術(shù)是一種結(jié)合了免疫化學(xué)和熒光標(biāo)記技術(shù)的方法,用于在細(xì)胞或組織樣本中檢測特定的抗原或抗體。進(jìn)行免疫熒光實驗通常需要以下實驗室儀器和設(shè)備:

熒光顯微鏡:用于觀察和拍攝熒光標(biāo)記的樣本。

載玻片和蓋玻片:用于制作樣本切片。

顯微鏡玻片加熱器:用于固定樣本。

孵育箱:用于在特定溫度下孵育樣本和試劑。

離心機(jī):用于離心樣本,如分離細(xì)胞或去除多余抗體。

移液器:用于準(zhǔn)確量取和轉(zhuǎn)移液體。

吸頭:與移液器配合使用,用于吸取和分配液體。

洗板機(jī):用于自動化洗滌步驟,減少交叉污染。

濕盒:用于在暗環(huán)境中孵育樣本。

顯微鏡載物臺加熱器:用于維持樣本溫度,尤其是在觀察活細(xì)胞時。

激光掃描共聚焦顯微鏡(可選):用于更高級的熒光成像。

pH計:用于調(diào)整和監(jiān)測溶液的pH值。

去離子水系統(tǒng):用于制備高純度的去離子水。

濾光片:用于選擇特定波長的光。

熒光染料:用于標(biāo)記抗體或抗原。

抗體和抗原儲存設(shè)備:如冰箱和-80°C超低溫冰箱。

生物安全柜:用于在無菌條件下操作樣本。

熱封膜機(jī):用于封膜顯微鏡玻片。

洗滌瓶和容器:用于存儲和洗滌試劑及樣本。

顯微鏡攝像頭:用于捕捉顯微鏡下的圖像。

圖像分析軟件:用于分析顯微鏡拍攝的圖像。


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