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干細(xì)胞培養(yǎng)基的配制與保存

更新時(shí)間:2025-05-26點(diǎn)擊次數(shù):88
  干細(xì)胞培養(yǎng)基的制備和使用是干細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵,但在實(shí)際操作中需要注意多個(gè)細(xì)節(jié)以確保細(xì)胞活性、穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。
  一、干細(xì)胞培養(yǎng)基配制與保存:
  1.嚴(yán)格遵循配方
  根據(jù)干細(xì)胞類型選擇專用培養(yǎng)基配方,不可隨意替換成分或調(diào)整比例(如生長(zhǎng)因子濃度、血清批號(hào))。
  例:多能干細(xì)胞依賴bFGF和LIF維持未分化狀態(tài),神經(jīng)干細(xì)胞需要EGF/FGF-2組合。
  2.無(wú)菌操作
  全程在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作,避免微生物污染(尤其血清、添加劑易滋生細(xì)菌)。
  分裝后的培養(yǎng)基需抽樣檢測(cè)無(wú)菌性(如細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn))。
  3.現(xiàn)配現(xiàn)用原則
  生長(zhǎng)因子和活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融失效。
  長(zhǎng)期儲(chǔ)存需冷凍,使用時(shí)快速解凍并一次性用完。
  4.過(guò)濾除菌
  使用濾膜正壓過(guò)濾,避免高壓滅菌(高溫會(huì)破壞生長(zhǎng)因子和蛋白質(zhì)成分)。
  5.保存條件
  短期保存:4℃冷藏(≤1周),避免反復(fù)開蓋污染。
  長(zhǎng)期儲(chǔ)存:分裝后-20℃~-80℃冷凍,標(biāo)注名稱、濃度和日期。
  干細(xì)胞培養(yǎng)基關(guān)鍵注意事項(xiàng):
  1.無(wú)菌操作
  全程在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成,避免微生物污染(尤其血清和添加劑易滋生細(xì)菌)。
  分裝后培養(yǎng)基可抽樣檢測(cè)無(wú)菌性(如細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn))。
  2.成分穩(wěn)定性
  生長(zhǎng)因子、β-ME等活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融。
  長(zhǎng)期儲(chǔ)存需冷凍,使用時(shí)快速解凍并一次性用完。
  3.批次一致性
  不同批次的血清或基礎(chǔ)培養(yǎng)基可能存在差異,需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證穩(wěn)定性。
  建議使用同一批號(hào)血清,并記錄詳細(xì)信息(如供應(yīng)商、生產(chǎn)日期)。
 

 

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0512-62956104

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