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使用微載體生物反應(yīng)器規(guī)模化擴增 Vero 細(xì)胞的方法

絕大多數(shù)貼壁Vero細(xì)胞擴增培養(yǎng)都是使用微載體技術(shù)在攪拌式細(xì)胞生物反應(yīng)器中進(jìn)行的。在這里，細(xì)胞附著在微載體上，微載體被設(shè)計成在攪拌培養(yǎng)中保持懸浮。微載體的種類很多，主要分為固體和大孔兩種，表面性質(zhì)不同。幾項研究比較了不同類型的微載體用于Vero細(xì)胞的繁殖.目前多數(shù)使用Cytodex1微載體.Cytodex1微載體是基于葡聚糖的固體微載體，顯示帶電表面，平均直徑為180μm左右。近年來，國內(nèi)生產(chǎn)的DISKS片狀載體孔徑只有15μm，單層厚度約0.44mm,可以維持較好的營養(yǎng)物質(zhì)...

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克隆抗體的特點和應(yīng)用

單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上，創(chuàng)建立雜交瘤技術(shù)，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細(xì)胞融合，成為雜交細(xì)胞系，既具有瘤細(xì)胞易于在體外無限增殖的特性，又具...

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多克隆抗體及抗體制備流程

抗體，又名免疫球蛋白(Ig)，是一種由B細(xì)胞產(chǎn)生的大型Y形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用?？贵w與病原體的特定分子（即抗原）發(fā)生特異性結(jié)合?？贵w以一個或者多個Y形單體存在，每個Y形單體由4條多肽鏈組成。每個Y形單體包含兩條相同的重鏈（H）和兩條相同的輕鏈（L），重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(qū)（V），也稱抗原結(jié)合片段（F(ab)）區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結(jié)合?？贵w的基本結(jié)構(gòu)包含恒定區(qū)（C）和可結(jié)晶片段（Fc）區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應(yīng)答功能非...

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蛋白酶K的應(yīng)用

近年來，隨著對蛋白酶K研究的深入，該酶的應(yīng)用范圍不僅在醫(yī)療診斷及科研領(lǐng)域得到了十分廣泛的應(yīng)用，該酶還作為替代其它作用范圍較窄的蛋白酶，主要應(yīng)用于造紙、工業(yè)制革、飼料生產(chǎn)、食品加工等行業(yè)中。此外，該酶還可以替代傳統(tǒng)的通過化學(xué)方法處理原材料的方法，減少污染。在各行各業(yè)中，蛋白酶K的主要用途有：①在分離DNA和RNA的過程中，用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)，促進(jìn)蛋白與核酸的分離，因此該酶在提取高分子量的核酸時具有很大的優(yōu)勢。蛋白酶K還常被用于RNA提取過...

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什么是蛋白酶K，蛋白酶K的生產(chǎn)有哪些挑戰(zhàn)？

蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環(huán)境中生長，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點催化三聯(lián)體(Asp39-...

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