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核酸酶切反應原理及注意事項

A載體和外源DNA的酶切一、實驗目的學習和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。絕大多數(shù)限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'...

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質粒DNA的提取實驗方法和步驟

質粒DNA的提取實驗方法和步驟一、實驗目的通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒的原理和步驟。二、實驗原理從細菌中分離質粒DNA的方法都包括3個基本步驟：培養(yǎng)細菌使質粒擴增；收集和裂解細胞：分離和純化質粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細胞膜裂解。經(jīng)溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后，細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上，同時由于細菌染色體DNA比質粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性...

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PCR反應的基本原理與實驗技術

一、實驗目的：掌握PCR反應的基本原理與實驗技術二、PCR反應實驗原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成后，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次...

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瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法

一、實驗目的：通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。二、實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即DNA分子本身的大小和構型。具有不同的相對分子質量的DNA片段泳動速度不一樣，可進行分離。DNA分子的遷移速度...

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病毒純化方法

病毒是一類非細胞型生物，需要寄生在其活細胞體內，雖然大部分病毒對人體是有害的，但是隨著科學的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)很多病毒有較高的利用價值。例如：可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關病毒等；還有噬菌體展示技術，可以幫助我們對蛋白質進行相關研究；以及曾作為細胞融合應用的仙臺病毒；而病毒最重要的應用，就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期，我們主要對病毒疫苗生產(chǎn)過程中的純化方法進行介紹。病毒提純是病毒學研究的重要前提，病毒的相關詳細研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活...

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